動物源性食品中 β-受體激動劑檢測的固相萃取方法
（PolyClean X-MCX）
一、實驗目的
本研究利用固相萃取法作為豬肉樣品的前處理方法，LC-MS/MS 法作為檢測手段。該方法可簡化豬肉樣品的前處理過程，節(jié)省有機溶劑的使用，操作簡便。
二、實驗目標物
五種 β-受體激動劑物質：克侖特羅(CAS:37148-27-9)，沙丁胺醇(CAS:18559-94-9)，萊克多巴胺(CAS:97825-25-7)，特布他林(CAS:23031-25-6)，妥布特羅(CAS:41570-61-0)。
三、應用范圍
本方法適用于動物源性食品中β-受體激動劑 LC-MS/MS 檢測及確證。
四、參考標準
《GB/T 21313-2007 動物源性食品中 β-受體激動劑殘留檢測方法液相色譜-質譜/質譜法》
五、實驗材料
NuAnalytical PolyClean X-MCX 固相萃取柱 200 mg/6 mL。
六、實驗方法
1、 樣品待測溶液制備
稱取均質豬肉試樣 10.0ｇ試樣（精確至 0.01 g），加入 15 mL pH 5.2 的乙酸-乙酸銨緩沖溶液，1000 r/min 勻漿 1min，再加入β-葡萄糖醛酸苷肽酶/芳香磺酸酯酶溶液 100 μL， 于 37 ℃±1 ℃振蕩酶解過夜。取出冷卻后，10 ℃9500 r/min 離心 10 min。取全部上清液。待凈化。
2、活化
加入 6 mL 甲醇、6mL 水、6mL 0.1mmol/L 高氯酸(pH 4.0)溶液活化。
3、上樣和洗脫
當溶劑液面到達柱吸附層表面時，立即倒入上述待凈化溶液，過柱，棄去濾液，用 2
mL 甲醇、2 mL 2%甲醇水溶液淋洗，最后用 7 mL5%氨化甲醇洗脫。
4、重新溶解
洗脫液緩慢氮氣流條件下吹至近干，用甲醇-0.1%甲酸水溶液溶解定容至 1.0 mL，渦旋混勻 1 min，用于 LC-MS/MS 測定。。
5、LC-MS/MS 條件
質譜儀：API 4000 色譜柱：SuperLu C18(2.0 mm×150 mm, 5 μm)
流動相：A: 乙腈 B: 0.1%甲酸水溶液
流速：0.2 mL/min 柱溫： 40 ℃ 進樣體積：2 μL
離子源：電噴霧(ESI) 掃描模式：正離子模式 檢測方式：多反應監(jiān)測(MRM)
洗脫方式：梯度洗脫，洗脫程序如下：
|
時間/min |
A(%) |
B(%) |
|
0.00 |
5 |
95 |
|
4.00 |
50 |
50 |
|
6.00 |
10 |
90 |
|
8.00 |
95 |
5 |
|
8.01 |
5 |
95 |
|
12.00 |
5 |
95 |
質譜儀離子源參數(shù)如下：
|
Source/Gas |
|
|
Collision Gas (CAD) |
10 |
|
Curtain Gas (CUR) |
30 |
|
Ion Source Gas 1 (GS1) |
50 |
|
Ion Source Gas 2 (GS2) |
50 |
|
Ion Spray Voltage (IS) |
5500 |
|
Temperature (TEM) |
550 |
|
Interface Heater (IHE) |
ON |
?-受體激動劑的母離子和子離子參數(shù)表：
|
物質名稱 |
保留時間/min |
檢測離子對 |
DP |
EP |
CE |
CXP |
|
特布他林 |
3.77 |
226.0/151.7
226.0/169.8 |
60
60 |
10
10 |
16
12 |
12
12 |
|
克倫特羅 |
5.82 |
227.1/202.9
227.1/259.0 |
60
60 |
10
10 |
23
15 |
12
12 |
|
萊克多巴胺 |
5.45 |
302.1/163.7
302.1/284.2 |
60
60 |
10
10 |
23
19 |
12
12 |
|
沙丁胺醇 |
3.86 |
240.1/147.8
240.1/221.9 |
60
60 |
10
10 |
18
12 |
12
12 |
|
妥布特羅 |
6.17 |
227.9/153.8
227.9/171.8 |
60
60 |
10
10 |
16
12 |
12
12 |
七、實驗結果
1、0.5μg/kg 豬肉基質加標回收結果：
|
名稱 |
1 |
回收率（%）
2 |
3 |
平均回收率（%） |
RSD（%） |
|
沙丁胺醇 |
88.62 |
88.79 |
81.45 |
84.29 |
4.52 |
|
克倫特羅 |
85.32 |
88.29 |
86.73 |
86.73 |
1.72 |
|
萊克多巴胺 |
86.56 |
88.33 |
81.36 |
85.42 |
4.24 |
|
特布他林 |
81.95 |
80.95 |
87.26 |
83.39 |
4.06 |
|
妥布特羅 |
82.64 |
82.56 |
88.14 |
84.45 |
3.79 |
2、添加水平為 0.5μg/kg 豬肉基質中β-受體激動劑檢測色譜圖
圖 1 ?-受體激動劑待測物總離子流圖 圖 2 沙丁胺醇(sabutamal)(240.1/147.8)色譜圖
圖 3 克倫特羅(clenbutecol)(277.1/202.9)色譜圖 圖 4 萊克多巴胺(ractopamine)(302.1/163.7)色譜圖
圖 5 特布他林(terbutaline)(226.0/151.7)色譜圖 圖 6 妥布特羅(tulcbutclol)(227.9/153.8)色譜圖
